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使用實(shí)時熒光PCR試劑盒時的注意事項(xiàng)有哪些?

瀏覽次數(shù):121發(fā)布日期:2026-02-02
  實(shí)時熒光PCR試劑盒能夠檢出單拷貝的靶標(biāo)DNA或RNA,即使樣本中的目標(biāo)序列含量極低,也能通過多輪擴(kuò)增產(chǎn)生足夠強(qiáng)的熒光信號被檢測到。這使得它在微量核酸的定量需求方面表現(xiàn)出色,如新冠病毒核酸檢測中,即使在感染初期病毒載量較低的情況下,也能準(zhǔn)確檢測出病毒的核酸。
 
  高特異性:試劑盒中的引物和探針是根據(jù)目標(biāo)基因的特殊序列精心設(shè)計(jì)的,只有當(dāng)引物正確地與目標(biāo)序列兩端互補(bǔ)配對,并且內(nèi)部的熒光探針與擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定區(qū)域緊密結(jié)合時,才會產(chǎn)生熒光信號。這種高度準(zhǔn)確的設(shè)計(jì)確保了檢測結(jié)果只針對目標(biāo)基因,大大減少了非特異性擴(kuò)增和假陽性結(jié)果的出現(xiàn)概率。
 
  準(zhǔn)確量化:通過Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系,可準(zhǔn)確測定起始拷貝數(shù),誤差小于±0.5個數(shù)量級。定量范圍寬,可在較廣的濃度范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析,滿足不同樣本類型和檢測需求。
 
  多重檢測能力:搭配不同熒光通道(如FAM/SYBR/HEX等),可在同一反應(yīng)管中同步檢測多個靶基因,適用于多病原體聯(lián)合篩查等復(fù)雜檢測場景,提高了檢測效率,降低了成本。
 
  使用實(shí)時熒光PCR試劑盒時的注意事項(xiàng):
 
  1.儲存條件
 
  -溫度控制:該試劑盒通常需要在低溫環(huán)境下儲存,以保持其活性和穩(wěn)定性。具體儲存溫度應(yīng)根據(jù)試劑盒說明書的建議進(jìn)行設(shè)定,通常為2-8℃或-20℃。
 
  -避免光照:熒光探針易受光照影響,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低。因此,在儲存和使用過程中,應(yīng)避免強(qiáng)光照射,建議在暗處操作。
 
  -避免反復(fù)凍融:該試劑盒中的成分易受反復(fù)凍融的影響,導(dǎo)致活性降低。因此,在使用過程中,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。
 
  -有效期限:注意檢查試劑盒是否過期,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
 
  2.操作規(guī)范
 
  -遵循說明書:嚴(yán)格按照試劑盒說明書的操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
 
  -試劑準(zhǔn)備:在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,確保所有試劑都已準(zhǔn)備好,并在使用過程中保持試劑的冷卻狀態(tài)。
 
  -樣品處理:對樣品進(jìn)行充分的處理,以確保樣品中的RNA或DNA質(zhì)量,并去除可能的污染物。
 
  -設(shè)備校準(zhǔn):在使用前對熒光定量PCR儀進(jìn)行校準(zhǔn),以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
 
  -實(shí)驗(yàn)過程監(jiān)控:在實(shí)驗(yàn)過程中實(shí)時監(jiān)控?zé)晒庑盘柕膹?qiáng)度,以確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。
實(shí)時熒光PCR試劑盒
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